食物中鈣的測定方法

本標準參照采用國際標準ISO 6490/2－1983《動物飼料——鈣含量測定——原子吸收分光光度法》。
　　1　主題內容與適用范圍
　　本標準規定了用原子吸收分光光度法和滴定法測定食物中鈣。
　　本標準適用于各種食物中鈣的測定。
　　第一篇　原子吸收分光光度法
　　2　原理
　　樣品經濕消化后，導入原子吸收分光光度計中，經火焰原子化后，吸收422.7nm的共振線，其吸收量與含量成正比，與標準系列比較定量。
　　3　試劑
　　要求使用去離子水，優級純試劑。
　　3.1　鹽酸(GB 622)。
　　3.2　硝酸(GB 626)。
　　3.3　高氯酸(GB 623)。
　　3.4　混合酸消化液：硝酸與高氯酸比為4∶1。
　　3.5　0.5N硝酸溶液：量取45mL硝酸，加去離子水并稀釋至1000mL。
　　3.6　2%氧化鑭溶液：稱取25g氧化鑭(純度大于99.99%)，加75mL鹽酸于1000mL容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度。
　　3.7　鈣標準溶液：精確稱取1.2486g碳酸鈣(純度大于99.99%)，加50mL去離子水，加鹽酸溶解，移入1000mL容量瓶中，加2%氧化鑭稀釋至刻度。貯存于聚乙烯瓶內，4℃保存。此溶液每毫升相當于500μg鈣。
　　3.8　鈣標準使用液：鈣標準使用液的配制見表1。
　　表1　鈣標準使用液配制
　　
　　鈣標準使用液配制后，貯存于聚乙烯瓶內，4℃保存。
　　4　儀器與設備
　　所用玻璃儀器均以硫酸－重鉻酸鉀洗液浸泡數小時，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反復沖洗，最后用去離子水沖洗曬干或烘干，方可使用。
　　4.1　實驗室常用設備。
　　4.2　原子吸收分光光度計。
　　5　操作步驟
　　5.1　樣品處理
　　5.1.1　樣品制備
　　微量元素分析的樣品制備過程中應特別注意防止各種污染。所用設備如電磨、絞肉機、勻漿器、打碎機等必須是不銹鋼制品。所用容器必須使用玻璃或聚乙烯制品，做鈣測定的樣品不得用石磨研碎。濕樣(如蔬菜、水果、鮮魚、鮮肉等)用水沖洗干凈后，要用去離子水充分洗凈。干粉類樣品(如面粉、奶粉等)取樣后立即裝容器密封保存，防止空氣中的灰塵和水分污染。
　　5.1.2　樣品消化
　　精確稱取均勻樣品干樣0.5～1.5g(濕樣2.0～4.0g，飲料等液體樣品5.0～10.0g)于250mL高型燒杯，加混合酸消化液20～30mL，上蓋表皿。置于電熱板或電沙浴上加熱消化。如未消化好而酸液過少時，再補加幾毫升混合酸消化液，繼續加熱消化，直至無色透明為止。加幾毫升去離子水，加熱以除去多余的硝酸。待燒杯中的液體接近2～3mL時，取下冷卻。用去離子水洗并轉移于10mL刻度試管中，加去離子水定容至刻度(測鈣時用2%氧化鑭溶液稀釋定容)。
　　取與消化樣品相同量的混合酸消化液，按上述操作做試劑空白試驗測定。
　　5.2　測定
　　將鈣、標準使用液分別配制不同濃度系列的標準稀釋液，見表2，測定操作參數見表3。
　　表2　不同濃度系列標準稀釋液的配制方法
　　（圖略）
　　表3　測定操作參數
　　（圖略）
　　其他實驗條件：儀器狹縫、空氣及乙快的流量、燈頭高度、元素燈電流等均按使用的儀器說明調至最佳狀態。
　　將消化好的樣液、試劑空白液和各元素的標準濃度系列分別導入火焰進行測定。
　　5.3　計算
　　5.3.1　標準曲線法
　　以各濃度系列標準溶液與對應的吸光度繪制標準曲線。鈣標準曲線如圖1所示。它的線性相關系數為0.9996。
　　（圖略）
　　測定用樣品液及試劑空白液由標準曲線查出濃度值(c及c0，再按式(1)計算。
　　
　　式中：X——樣品中元素的含量，同mg/100g；
　　c——測定用樣品中元素的濃度(由標準曲線查出)，μg/mL；
　　c0——試劑空白液中元素的濃度(由標準曲線查出)，μg/mL；
　　V——樣品定容體積，mL；
　　f——稀釋倍數；
　　m——樣品質量，g；
　　（圖略）
　　5.3.2　回歸方程法
　　由各元素標準稀釋液濃度與對應的吸光度計算出回歸方程(也可以輸入計算器得出回歸方程)，計算見式(2)。
　　c＝ay＋b……………………………………………(2)
　　式中：c——測定用樣品中元素的濃度(可由計算器直接得出，μg/mL)；
　　a——曲線斜率；
　　y——元素的吸收度；
　　b——曲線的截距。
　　由回歸方程或計算器得出測定樣液及試劑空白液的濃度后，再由式(3)計算。
　　
　　式中各字母的含義同曲線法說明。
　　5.3.3　結果的重復性
　　同實驗室平行測定或連續兩次測定結果的重現性鈣小于10%。
　　最低檢測限：鈣0.1μg。
　　第二篇　滴定法(EDTA法)
　　6　原理
　　鈣與氨羧絡合劑能定量地形成金屬絡合物，其穩定性較鈣與指示劑所形成的絡合物為強。在適當的pH值范圍內，以氨羧絡合劑EDTA滴定，在達到當量點時，EDTA就自指示劑絡合物中奪取鈣離子，使溶液呈現游離指示劑的顏色(終點)。根據EDTA絡合劑用量，可計算鈣的含量。
　　7　試劑
　　要求使用去離子水，優級純試劑。
　　7.1　1.25mol/L氫氧化鉀溶液：精確稱取71.13g氫氧化鉀，用去離子水稀釋至1000mL。
　　7.2　1%氰化鈉溶液：稱取1.0g氰化鈉，用去離子水稀釋至100mL。
　　7.3　0.05mol/L檸檬酸鈉溶液：稱取14.7g檸檬酸鈉(Na3C6H5O7·2H2O)，用去離子水稀釋至1000mL。
　　7.4　混合酸消化液：硝酸(GB 626)與高氯酸(GB 623)比為4∶1。
　　7.5　EDTA溶液：精確稱取4.50g EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)，用去離子水稀釋至1000mL，貯存于聚乙烯瓶中，4℃保存。使用時稀釋10倍即可。
　　7.6　鈣標準溶液：精確稱取0.1248g碳酸鈣(純度大于99.99%，105～110℃烘干2h)，加20mL去離子水及3mL 0.5mol/L鹽酸溶解，移入500mL容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，貯存于聚乙烯瓶中，4℃保存。此溶液每毫升相當于100μg鈣。
　　7.7　鈣紅指示劑：稱取0.1g鈣紅指示劑(C21O7N2SH14)，用去離子水稀釋至100mL，溶解后即可使用。貯存干冰箱中可保持一個半月以上。
　　8　儀器與設備
　　所有玻璃儀器均以硫酸－重鉻酸鉀洗液浸泡數小時，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反復沖洗，最后用去離子水沖洗曬干或烘干，方可使用。
　　8.1　實驗室常用玻璃儀器：高型燒杯(250mL)，微量滴定管(1或2mL)，堿式滴定管(50mL)，刻度吸管(0.5～1mL)，試管等。
　　8.2　電熱板：1000～3000W，消化樣品用。
　　9　樣品制備
　　同第一篇。
　　10　操作步驟
　　10.1　樣品消化
　　同第一篇。
　　10.2　測定
　　10.2.1　標定EDTA濃度
　　吸取0.5mL鈣標準溶液，以EDTA滴定，標定其EDTA的濃度，根據滴定結果計算出每毫升EDTA相當于鈣的毫克數，即滴定度(T)。
　　10.2.2　樣品及空白滴定
　　吸取0.1～0.5mL(根據鈣的含量而定)樣品消化液及空白于試管中，加1滴氰化鈉溶液和0.1mL檸檬酸鈉溶液，用滴定管加1.5mL 1.25mol/L氫氧化鉀溶液，加3滴鈣紅指示劑，立即以稀釋10倍EDTA溶液滴定，至指示劑由紫紅色變藍為止。
　　10.3　計算
　　樣品中該元素的含量按式(4)計算：
　　
　　式中：X——樣品中元素含量，mg/100g；
　　T——EDTA滴定度，mg/mL；
　　V——滴定樣品時所用EDTA量，mL；
　　V0——滴定空白時所用EDTA量，mL；
　　f——樣品稀釋倍數；
　　m——樣品稱重量，g。
　　11　結果的重復性
　　同實驗室平行測定或連續兩次測定結果的重復性小于10%。
　　本方法的檢測范圍：5～50μg。




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